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豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白1βelisa檢測(cè)試劑盒說明書

日期:2023/11/13瀏覽:484次

    豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白1βelisa檢測(cè)試劑盒說明書

  

elisa試劑盒常見組成部分: 

1)酶和底物:在ELISA中zui常用的酶為HRP和ALP。

2)抗體:在ELISA中應(yīng)用的抗體可分為多克隆抗體(多抗)和單克隆抗體(單抗)。

3)抗原:在ELISA中應(yīng)用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有三類,即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原。

4 人E選擇素(E-Selectin/CD62E)檢測(cè)試劑盒包被:將免疫活性物質(zhì)(抗原或抗體)結(jié)合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等;常用的方法有吸附法、化學(xué)交聯(lián)法及親和素-生物素間接包被法

5)固相載體:固相載體是ELISA中用以分離結(jié)合標(biāo)記物和游離標(biāo)記物的主要手段,應(yīng)與各種免疫活性物質(zhì)有良好的結(jié)合性能并且不改變其免疫活性。常用的固相載體有聚苯乙烯塑料和硝酸纖維素膜。

 豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白1βelisa檢測(cè)試劑盒樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:

ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

(1)血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

(2)血漿:

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

(3)尿液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:

檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

(5)培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

(6)組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

 豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白1βelisa檢測(cè)試劑盒操作步驟


1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

 豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白1βelisa檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)


1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。


2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。


3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。


4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。


5. 底物請(qǐng)避光保存。


6. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).


7. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。


8. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。


9.如需代測(cè)或者樣本暫時(shí)不測(cè)定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間避免反復(fù)凍融,-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。

10. 豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白1βelisa檢測(cè)試劑盒試劑使用須知:

11.(1)請(qǐng)參照相關(guān)法規(guī)、文獻(xiàn)、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進(jìn)行安全操作。

12.(2)通常購買試劑時(shí)一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,更加注意其他保管和管理。

13.(3)萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作。對(duì)于使用后的廢棄物,不要或者舊的試劑,應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。

14.(4)購買后,請(qǐng)務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng);做好預(yù)防顛倒,摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng),做好必要的安全對(duì)策;對(duì)沒有標(biāo)明其危害特性、有害特性的,也要慎重地進(jìn)行操作;必須帶好防護(hù)用具,小心翼翼進(jìn)行操作。


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